Pour poursuivre notre série d’articles sur les techniques de purification des protéines, nous nous penchons dans celui-ci sur la SEC ou Size Exclusion Chromatographie, séparation des molécules selon leurs tailles.
Dans la stratégie CEP (Capture, Enhance, Polishing) de purifications des protéines, parmi toutes les techniques disponibles, celle-ci est la plus souvent utilisée.
SEC (Size Exclusion Chromatography) – Chromatographie par exclusion de taille
Pour cette technique, les molécules sont discriminées en fonction de leur taille. L’ordre d’élution est inversement proportionnel au rayon hydrodynamique des protéines, les molécules les plus volumineuses sont donc exclues en premier. La résine chromatographique polymérique, sur base silice ou agarose, est traitée de telle sorte qu’elle ne présente aucune interaction avec les molécules à séparer. De ce fait, l’élution est strictement isocratique.
Pour que la séparation soit la plus efficace possible, la phase stationnaire doit présenter la porosité la plus précise possible.
Il existe un grand nombre de phases mobiles et toutes présentent les mêmes caractéristiques :
- Solubilise l’échantillon
- Permette au gel de gonfler
- Compatible avec les détecteurs
- Elution isocratique
Buffers ex: TRIS, phosphate, NaCl, & neutral detergent
Déroulement d’une séparation en SEC
Influence de la taille des colonnes sur la séparation des protéines
L’augmentation de la longueur des colonnes améliore la résolution.
Une colonne |
2 colonnes |
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Colonnes de 300 mm : Analytique/Micropurification
Colonnes de 600 – 1000 mm : Préparative
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- Notre précédents articles sur les techniques de purification des protéines :
– Guide : Techniques d’analyse et de purification des molécules biologiques
– Analyse & purification des protéines : tout sur la chromatographie par échange d’ions (IEX)
– Analyse & purification des protéines : tout sur la chromatographie par affinité - Suivez nos actualités sur LinkedIn